Tinción de Romanowsky - Romanowsky stain
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La tinción de Romanowsky , también conocida como tinción de Romanowsky-Giemsa , es una técnica de tinción prototípica que fue la precursora de varias tinciones distintas pero similares ampliamente utilizadas en hematología (el estudio de la sangre) y citopatología (el estudio de células enfermas). Las tinciones de tipo Romanowsky se utilizan para diferenciar células para el examen microscópico en muestras patológicas , especialmente sangre y extensiones de médula ósea , y para detectar parásitos como la malaria en la sangre. Las tinciones que se relacionan o derivan de las tinciones de tipo Romanowsky incluyen las tinciones de Giemsa , Jenner , Wright , Field , May-Grünwald y Leishman . La técnica de tinción lleva el nombre del médico ruso Dmitri Leonidovich Romanowsky (1861-1921), quien fue uno de los primeros en reconocer su potencial para su uso como tinción de sangre.
Mecanismo
El valor de la tinción de Romanowsky radica en su capacidad para producir una amplia gama de tonos, lo que permite diferenciar fácilmente los componentes celulares. Este fenómeno se conoce como efecto Romanowsky , o más generalmente como metacromasia .
Efecto Romanowsky
En 1891 Romanowsky desarrolló una tinción usando una mezcla de eosina (típicamente eosina Y ) y soluciones envejecidas de azul de metileno que formaban tonos no atribuibles a los componentes de tinción por sí solos: tonos distintivos de púrpura en la cromatina del núcleo celular y dentro de los gránulos en el citoplasma de algunos glóbulos blancos. Esto se conoció como el efecto Romanowsky o Romanowsky-Giemsa. La eosina y el azul de metileno puro solos (o en combinación) no producen el efecto Romanowsky, y ahora se considera que los tintes activos que producen el efecto son el azul B y la eosina.
Azul de metileno policromado
Las tinciones tipo Romanowsky se pueden hacer a partir de una combinación de tintes puros o de azul de metileno que ha sido sometido a desmetilación oxidativa , lo que da como resultado la descomposición del azul de metileno en muchas otras tinciones, algunas de las cuales son necesarias para producir el efecto Romanowsky. . El azul de metileno que ha sufrido este proceso oxidativo se conoce como "azul de metileno policromado". El azul de metileno policromado puede contener hasta 11 tintes, incluidos azul de metileno , azul A , azul B, azul C, tionina , violeta de metileno Bernthesen, metiltionolina y tionolina. La composición exacta del azul de metileno policromado depende del método utilizado, e incluso los lotes del tinte del mismo fabricante pueden variar en composición.
Aunque se ha demostrado que el azul B y la eosina son los componentes necesarios para producir el efecto Romanowsky, estos tintes en sus formas puras no siempre se han utilizado en la formulación de las soluciones de tinción. Las fuentes originales de azur B (uno de los productos de oxidación del azul de metileno) procedían de soluciones de azul de metileno policromado, que se trataron con agentes oxidantes o se dejaron envejecer naturalmente en el caso de Romanowsky. Ernst Malachowsky en 1891 fue el primero en policromar el azul de metileno a propósito para usarlo en una tinción tipo Romanowsky.
Tipos
May-Grünwald-Giemsa
La tinción de May-Grünwald-Giemsa es un procedimiento de dos pasos que incluye la primera tinción con la tinción de May-Grünwald, que no produce el efecto Romanowsky, seguida de la tinción con la tinción de Giemsa que sí produce el efecto Romanowsky.
Tinciones de Wright y Wright-Giemsa
La tinción de Wright se puede utilizar sola o en combinación con la tinción de Giemsa, que se conoce como tinción de Wright-Giemsa. La tinción de Wright lleva el nombre de James Homer Wright, quien en 1902 publicó un método utilizando calor para producir azul de metileno policromado, que se combina con eosina Y. El azul de metileno policromado se combina con eosina y se deja precipitar, formando un eosinato que se redisuelve en metanol. . La adición de Giemsa al tinte de Wright aumenta el brillo del color "púrpura rojizo" de los gránulos citoplasmáticos. Las tinciones de Wright y Wright-Giemsa son dos de las tinciones de tipo Romanowsky de uso común en los Estados Unidos y se utilizan principalmente para la tinción de extensiones de sangre y médula ósea.
Tinción de Leishman
En 1901 William Leishman desarrolló una mancha similar a la de Louis Jenner pero con la sustitución del azul de metileno puro por azul de metileno policromado. La tinción de Leishman se prepara a partir del eosinato de azul de metileno policromado y eosina Y utilizando metanol como disolvente.
Tinción de Giemsa
La tinción de Giemsa se compone de "Azure II" y eosina Y con metanol y glicerol como disolvente. Se cree que "Azure II" es una mezcla de azul B (que Giemsa llamó "azul I") y azul de metileno, aunque la composición exacta de "azul I" se considera un secreto comercial. Se han publicado formulaciones comparables que utilizan tintes conocidos y están disponibles comercialmente. La tinción de Giemsa se considera la tinción estándar para la detección e identificación del parásito de la malaria.
Importancias clínicas
Patología de la sangre y la médula ósea
Las tinciones de tipo Romanowsky se utilizan ampliamente en el examen de sangre, en forma de frotis de sangre , y en el examen microscópico de biopsias de médula ósea y frotis de aspirado. El examen tanto de la sangre como de la médula ósea puede ser de importancia en el diagnóstico de una variedad de enfermedades de la sangre. En los Estados Unidos, las variantes Wright y Wright-Giemsa de las tinciones de tipo Romanowsky se utilizan ampliamente, mientras que en Europa se emplea habitualmente la tinción de Giemsa.
Detección de malaria y otros parásitos.
De las tinciones de tipo Romanowsky, la tinción de Giemsa es especialmente importante en la detección e identificación de parásitos de la malaria en muestras de sangre . Las pruebas de detección del antígeno de la malaria son una alternativa a la tinción y el examen microscópico de frotis de sangre para la detección de la malaria.
Uso en citopatología
Las tinciones de tipo Romanowsky también se utilizan para la tinción de muestras citopatológicas como las producidas a partir de aspirados con aguja fina y líquido cefalorraquídeo de punciones lumbares .
Historia
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Aunque existe un debate sobre quién merece crédito por este método de tinción general, el uso popular lo ha atribuido a Dmitri Leonidovich Romanowsky.
En la década de 1870, Paul Ehrlich utilizó una mezcla de tintes ácidos y básicos que incluían fucsina ácida (tinte ácido) y azul de metileno (tinte básico) para examinar frotis de sangre. En 1888, Cheslav Ivanovich Chenzinsky utilizó azul de metileno, pero sustituyó la fucsina ácida utilizada por Ehrlich por eosina. La combinación de tinciones de Chenzinsky pudo teñir el parásito de la malaria (un miembro del género Plasmodium ). Ni las tinciones de Ehrlich ni las de Chenzinsky produjeron el efecto Romanowsky ya que el azul de metileno que utilizaron no era policromado.
Dmitri Romanowsky en 1890 publicó los hallazgos preliminares de su mancha de sangre (una combinación de azul de metileno envejecido y eosina), incluidos los resultados cuando se aplicó a sangre infectada con malaria. Este uso de azul de metileno policromado diferenciaba la tinción de Romanowsky (y las formulaciones posteriores) de las de Ehrlich y Chenzinsky, que carecían del tono púrpura asociado con el efecto Romanowsky. La publicación de Romanowsky de 1890 no incluyó una descripción de cómo modificó su solución de azul de metileno, pero en su tesis doctoral de 1891 describió mejor el uso del azul de metileno después de que el moho comenzó a formarse en la superficie. Aparte del uso de una solución de azul de metileno envejecida, la tinción de Romanowsky se basó en la técnica de tinción de Chenzinsky. El uso de Romanowsky de su método para estudiar el parásito de la malaria se ha atribuido al continuo interés en su método de tinción.
A Ernst Malachowsky se le atribuye la observación independiente de la misma combinación de tinciones que Dmitri Romanowsky en 1891, aunque también se le atribuye el mérito de haber sido el primero en hacerlo. Malachowsky fue el primero en usar una solución de azul de metileno deliberadamente policromado, lo que Malachowsky logró mediante la adición de bórax a la mezcla de tinción. Se dice que Malachowsky demostró la mancha el 15 de junio de 1890 y que ese mismo año publicó un artículo "describiendo su manifestación pública". Tanto el método de Romanowsky como el de Malachowsky consiguieron teñir el núcleo y el citoplasma del parásito de la malaria , cuando hasta ese momento las tinciones empleadas sólo habían coloreado el citoplasma.
En 1899, Louis Leopold Jenner desarrolló una versión más estable de la tinción con azul de metileno y eosina al recolectar el precipitado que se forma en mezclas a base de agua y redisolverlo en metanol . Las tinciones de tipo Romanowsky preparadas a partir de los precipitados recogidos se conocen a veces como eosinatos . Además de aumentar la estabilidad de la mancha, el uso de metanol en la mancha de Jenner tuvo el efecto de fijar las muestras de sangre, aunque la versión de Jenner de la mancha no produce el efecto Romanowsky.
Richard May y Ludwig Grünwald en 1892 publicaron una versión de la mancha (ahora conocida como la mancha de May-Grünwald ) que es similar a la versión propuesta por Jenner en 1899, y tampoco produce el efecto Romanowsky.
En 1901, tanto Karl Reuter como William Leishman desarrollaron tinciones que combinaban el uso de alcohol de Louis Jenner como solvente y el uso de azul de metileno policromado por Malachowsky. Tinción de Reuter difería de Jenner de en el uso de alcohol etílico en lugar de metanol, y Leishman de difería de Jenner de mediante el uso de eosina B en lugar de eosina Y .
James Homer Wright en 1902 publicó un método usando calor para policromar el azul de metileno, que combinó con eosina Y. Esta técnica se conoce como tinción de Wright .
El nombre de Gustav Giemsa también se ha asociado con la mancha, ya que se le atribuye la publicación de una formulación y un protocolo útiles en 1902. Giemsa intentó utilizar combinaciones de tintes puros en lugar de soluciones de azul de metileno policromado que son de composición muy variable. Giemsa vendió los derechos para producir su tinte, pero nunca publicó todos los detalles sobre cómo lo produjo, aunque se cree que usó una combinación de azul B y azul de metileno. Giemsa publicó una serie de modificaciones de sus tinciones entre 1902 y 1934. En 1904 sugirió agregar glicerina a su tinte, junto con el metanol, para aumentar su estabilidad.
Los polvos de tinción de Giemsa producidos en Alemania se utilizaron ampliamente en los Estados Unidos hasta la interrupción del suministro durante la Primera Guerra Mundial , lo que provocó una mayor utilización del método de James Homer Wright para policromar azul de metileno.
Ver también
- La mancha de Liu
- Pruebas de detección del antígeno de la malaria.
- Tinción de Papanicolaou
- Tinción (biología)