Inmunoperoxidasa - Immunoperoxidase
La inmunoperoxidasa es un tipo de inmunotinción que se utiliza en biología molecular , investigación médica y diagnóstico clínico. En particular, las reacciones de inmunoperoxidasa se refieren a una subclase de procedimientos inmunohistoquímicos o inmunocitoquímicos en los que los anticuerpos se visualizan mediante una reacción catalizada por peroxidasa.
La inmunohistoquímica y la inmunocitoquímica son métodos que se utilizan para determinar en qué células o partes de células se encuentran ubicadas una proteína u otra macromolécula en particular . Estas tinciones usan anticuerpos para unirse a antígenos específicos , generalmente de origen proteico o glicoproteico . Dado que los anticuerpos son normalmente invisibles, se deben emplear estrategias especiales para detectar estos anticuerpos unidos. En un procedimiento de inmunoperoxidasa, se usa una enzima conocida como peroxidasa para catalizar una reacción química para producir un producto coloreado.
Simplemente, se fija una porción muy fina de tejido sobre vidrio, se incuba con un anticuerpo o una serie de anticuerpos, el último de los cuales está químicamente ligado a la peroxidasa. Después de desarrollar la mancha agregando el sustrato químico , la distribución de la mancha se puede examinar al microscopio .
Tipos de anticuerpos
Originalmente, todos los anticuerpos producidos para la inmunotinción eran policlonales , es decir, producidos por reacciones normales de anticuerpos en animales como caballos o conejos. Ahora, muchos son monoclonales , es decir, se producen en cultivo de tejidos. Los anticuerpos monoclonales que consisten en un solo tipo de anticuerpo tienden a proporcionar una mayor especificidad de antígeno y también tienden a ser más consistentes entre lotes.
Métodos de tinción con inmunoperoxidasa
El primer paso en la tinción de inmunoperoxidasa es la unión del anticuerpo específico (primario) a la muestra de célula o tejido. La detección del anticuerpo primario se puede lograr entonces directamente (ejemplo 1) o indirectamente (ejemplos 2 y 3).
- Ejemplo 1. El anticuerpo primario se puede marcar directamente con la enzima peroxidasa que luego se usa para catalizar una reacción química para generar un producto coloreado.
- Ejemplo 2. El anticuerpo primario se puede marcar con una molécula pequeña que puede ser reconocida por una molécula de unión conjugada con peroxidasa con alta afinidad. El ejemplo más común de esto es un anticuerpo primario ligado a biotina que se une a una estreptavidina unida a enzima . Este método se puede utilizar para amplificar la señal.
- Ejemplo 3. Se detecta un anticuerpo primario sin marcar usando un anticuerpo secundario general que reconoce todos los anticuerpos que se originan en la misma especie animal que el primario. El anticuerpo secundario está marcado con peroxidasa.
La tinción óptima depende de una serie de factores que incluyen la dilución del anticuerpo, los productos químicos de tinción, la preparación y / o fijación de las células / tejido y la duración de la incubación con anticuerpos / reactivos de tinción. Estos a menudo se determinan por prueba y error en lugar de cualquier tipo de enfoque sistemático.
Alternativas a las tinciones de peroxidasa
Se pueden utilizar otras enzimas catalíticas como la fosfatasa alcalina en lugar de las peroxidasas para los métodos de tinción tanto directos como indirectos. Alternativamente, el anticuerpo primario puede detectarse usando un marcador fluorescente ( inmunofluorescencia ) o unirse a partículas de oro coloidal para microscopía electrónica .
Usos de la tinción con inmunoperoxidasa
La tinción con inmunoperoxidasa se utiliza en diagnósticos clínicos y en investigación de laboratorio .
En el diagnóstico clínico, la inmunotinción se puede utilizar en biopsias de tejido para un estudio histopatológico más detallado . En el caso del cáncer, puede ayudar a subclasificar los tumores. La inmunotinción también se puede utilizar para ayudar a diagnosticar enfermedades de la piel, glomerulonefritis y para subclasificar los depósitos de amiloide . Las técnicas relacionadas también son útiles para subtipificar linfocitos, que se ven muy similares en el microscopio óptico.
En la investigación de laboratorio, se pueden usar anticuerpos contra marcadores específicos de diferenciación celular para marcar tipos de células individuales. Esto puede permitir una mejor comprensión de los cambios mecánicos en linajes celulares específicos resultantes de una intervención experimental particular.